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优化的系统,用于研究EPO依赖的小鼠促红细胞生成

  • 张迪雅
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  • 马修·约翰逊(Matthew M Johnson)
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  • 克里斯·P·米勒
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  • 托尼·皮彻(Tony J Pircher)
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  • 贾斯汀·N·盖格
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  • 唐·M·沃乔夫斯基
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      抽象

      目的

      目的s were to develop new means to isolate useful numbers of primary progenitor 细胞并定量分析成红细胞的逐步成熟。

      方法

      方法包括给小鼠服用甲砜霉素(TAP)以产生分阶段的 前红系细胞;优化其EPO依赖的体外生长条件 和生存;开发CFU-E成熟的检测方法;分析特定阶段的成绩单 表达;并在转基因中表达异源的类红细胞特异性标签(EE372) mice.

      结果

      每只TAP治疗的小鼠3×10 7 产生高度EPO反应性的类红细胞祖细胞,该细胞代表 高达总脾细胞的30​​%,并且对生存,生长,生长, 和即时反应基因表达。在这个不断发展的队列中, 观察到基因表达的顺序,并且最大表达c-kit,EPO受体, TAP撤离后72、96和120小时分别发生β和珠蛋白的转录。 另外,新发现的类红细胞特异性双特异性激酶DYRK3 显示在CFU-E晚期表达。在体外,这些祖细胞成熟 从高FALS Ter119逐步 细胞(24小时培养)至高FALS Ter119 + 细胞(24–36小时)至低FALS Ter119 + 成熟的成红细胞(40-48小时)及其形态存在明显差异 被观察。最后,基于MACS的红细胞祖细胞的纯化程序 还开发了来自TAP处理的EE372转基因小鼠的细胞。

      结论

      全面的新系统可分离大量原代鼠类红细胞 建立祖细胞并定量监测其发育, 应在研究内源性和药理学调节剂方面发挥良好作用 红细胞发育。
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